在常规自身免疫性疾病的血清学诊断中，检测抗核抗体（ANA）水平和针对自身抗原的特异性的自身抗体（autoAb）是最主要的诊断和鉴别依据。
系统性自身免疫性风湿病（SARD）的血清学诊断采用 ANA 双重检测法，即第一步采用高敏感性的间接免疫荧光法（IIF），以 HEp-2 细胞为底物，初步筛选 ANA，然后再采用其他的免疫方法如 ELISA，对 IIF 筛选出的 ANA 阳性结果进行确证。
目前为止，IIF 法检测 ANA 水平仍然是 SARD 血清学诊断的「金标准」，且 ANA 检测已被国际专家组列为 SARD 血清学诊断的首要实验。但是，由于双重法操作繁琐，不利于大型实验室的高通量分析。研究者们曾试图采用不同的分析平台来替代双重检测法，例如激光焊免疫分析法等，效果均不能达到 IIF 分析的诊断敏感性。
为克服上述方法的缺点，Juliane Scholz 等开发了一种新技术即 CytoBead ANA 分析，设计一种独特的 IIF 反应环境，可以同时结合 HEp-2 基础上的经典 ANA 分析与自身抗体的多重微珠免疫分析法。实现筛选和确证实验同一环境同步进行，创建了二代 ANA 检测的基础。文章发表于近期的 Clin Chem Lab Med 杂志上。
课题组率先将数字荧光显微镜应用于 autoAb 检测，通过研发一种自动 IIF 分析系统 AklidesTM，使 autoAb IIF 分析标准化。而且，为实现 autoAb 同步检测，我们设置了一个多重 IIF 分析，将不同自身抗原包被于具有不同粒径的荧光微粒表面。两种技术的融合使得 ANA 初筛和多重确证实验得以在一次实验中完成。利用数字荧光实现了 ANA 自动定量分析。
通过对比二代 ANA 分析与经典双重免疫分析，本研究首次对初筛和确证实验结合的 CytoBead ANA 实验进行了临床评估。
该研究采集 697 例血清样本，分别来自 101 健康捐献者，103 例自身硬化症患者（SSc），46 例干燥综合征（SjS），174 例 SLE 患者，36 例类风湿性关节炎（RA），34 例其他 SARD 患者以及 21 例感染病人。
首先确定二代 ANA 分析临界值，据 ROC 曲线，对应于自身抗原 dsDNA, CENP-B, SS-B/La, Sm, RNP-Sm,Scl-70, SS-A/Ro52 和 SS-A/Ro60，其自身抗体的临界值分别是 10.0 IU/mL, 9.7 AU/mL,11.0 AU/mL, 9.4 AU/mL, 8.7 AU/mL, 5.5 AU/mL, 10.2 AU/mL, and 11.5 AU/mL。
分别利用经典 ANA 检测法（IIF 和 ELISA）和 CytoBead ANA 法检测 697 例血清样本中的 ANA 和特异性自身抗体水平。将最终获得的数据进行比较发现，CytoBead ANA 分析中阳性率为 61.4% ，而且 ANA 阳性样本中，84.1% 的样本至少出现一种特异性 autoAb 阳性。而 ANA 检测法阳性率为 60.3%，ELISA 检测发现其中 85% 至少一种特异性自身抗体阳性。传统 IIF 检测方法和 ELISA 分别与 CytoBead 法两两比较发现均有较好的符合率（κ> 0.95、κ> 0.80）；对于 SS-B/La, RNP-Sm, ScL-70, SS-A/Ro60 和 SS-A/Ro52，方法间并无明显差异。比较经典 ELISA 和 CytoBead ANA 分析得出，几种自身抗体的 Spearman’s 等级相关系数在 0.3 至 0.64 之间（抗 dsDNA:0.64, 抗 CENP-B：0.49， SS-B/La：0.30，抗 Sm：0.38）。
对于 ANA 和 dsDNA、CENP-B、SS-B、RNP-Sm、 Scl-70、 SS-A/Ro52 以及 SS-A/Ro60 自身抗体的检测，二代 ANA 检测与经典的 IIF 和 ELISA 方法有很好的一致性（κ> 0.8）。对于抗 Sm 抗体检测，两者一致性较好（κ= 0.77）。
此次比较临床分析结果的较好一致性支持这一假设——在一步 ANA 分析的新的 IIF 反应环境中，HEp-2 细胞和自身抗原包被的荧光微粒分别作为靶标，可以提供至少像经典双重 ANA 检测一样的分析功能。因此，通过解决目前双重 ANA 分析的不足，这一涉及二代 ANA 检测的新方法可以满足现代常规实验室更好的为 SARD 血清学服务的要求。