维生素检验之串联质谱技术

2016-11-08 14:19 来源:丁香园 作者:王兴光
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知识背景

自二胎政策放开以来,包括高龄产妇在内的孕产妇队伍不断壮大,每个家庭追求高质量生育的要求越来越强烈:孕期不错过任何一项医院开展的检验检查,如唐氏筛查、彩超畸形筛查、妊娠期糖尿病筛查(OGTT 实验)、TORCH 筛查、遗传性耳聋基因检测、孕晚期每周一次的胎心监护等等,孕妇经常在做完检查后会问医生:「还有没有应该查的项目?」。其实孕产妇也应该进行维生素检测。

现状及意义

谈到维生素,大家可能对其重视程度不够,但维生素确实和我们的健康关系十分密切,一个简单的经历可以让我们重视维生素检测的意义:出生 2 个月的婴儿,出现哮喘症状,很多人会首先想到是否因为感染引起的支气管炎或肺炎等等,使用了多种药物后,仍不见起色,结果竟是由于缺钙引起的,众所周知缺钙是由于维生素 D 缺乏导致的,可见维生素检验意义重大。

维生素是人体的重要生命元素。维生素种类很多,包括维生素 B1(硫胺素)、维生素 B2(核黄素)、维生素 B3(烟酸)、维生素 B12、维生素 A、维生素 D、维生素 E、维生素 K 等等。本文以维生素 D 为例,说明维生素检测在孕产妇及新生儿人群中的意义。

维生素 D 缺乏会导致佝偻病等骨科疾病最为熟知,然而孕妇维生素 D  缺乏带来的疾病隐患同样不容小觑。由于产前孕妇多缺乏户外活动,接受日照时间少,加之妊娠期胎儿生长发育需要以及双胎等因素的影响,很多孕妇在妊娠期间会出现维生素 D 不足的现象。

维生素 D 在人体内参与多条代谢代谢途径:如钙-磷代谢。维生素 D 缺乏会导致严重的后果,特别对于妊娠期女性而言会导致:新生儿延迟性低血钙、增加后代早年Ⅰ型糖尿病、婴儿期变态反应性疾病、婴儿下呼吸道合胞病毒感染、一定程度加大儿童语言障碍发生风险等等,有最新的研究表明维生素 D  缺乏会导致心脏病、糖尿病、自身免疫性疾病、几种类型的肿瘤。有研究还表明,在妊娠早期,若维生素 D 浓度 < 37.5 nmol/L(即 15 ng/mL),孕妇患妊娠高血压几率会增加 5 倍。

25(OH)D 是机体维生素 D  的主要储存形式,占总量的 95% 以上,由于其半衰期长(2~3 周),并且不受血钙和甲状旁腺激素激素的影响,因此被公认是客观评价维生素营养状况的最佳指标。

诊断标准:孕母血清总 25(OH)D ≤ 20 ng/mL 为维生素 D 缺乏;> 20 ng/mL 但是 ≤ 30 ng/mL 为维生素 D 不足;> 30 ng/mL 为维生素 D  充足,建议孕妇血清 25(OH)D 水平保持在 27.55 ng/mL 以上,可预防维生素 D  缺乏的发生。新生儿血清总 25(OH)D ≤ 15 ng/mL 为维生素 D  缺乏;> 15 ng/mL 但是 ≤ 20 ng/mL 为维生素 D  不足;> 20 ng/mL 为维生素 D  充足。2015 年《维生素 D  缺乏及维生素 D  缺乏性佝偻病防治建议》指出,为预防维生素 D  缺乏及维生素 D  缺乏性佝偻病,可于妊娠后 3 个月补充维生素 D 800~1000 IU/d。

在临床工作中应重点关注以下几个话题:对于妊娠糖尿病患者普遍存在维生素 D  缺乏,并且维生素 D  缺乏是导致胰岛素抵抗的重要原因之一,及时检测 25(OH)D3 浓度,采取相应措施,对防治妊娠糖尿病具有一定的意义,临床上可以通过调节维生素 D  水平对妊娠期糖尿病的发病或血糖水平进行干预。

大量的动物和人群研究表明维生素 D  在免疫系统、肺器官发育以及抗炎方面的作用。对于哮喘患儿,补充维生素 D  可以增加地塞米松对于哮喘的免疫调节作用。孕期维生素 D  与剖宫产、死产、孕妇阴道感染、牙周炎、神经系统发育异常等不良妊娠结局有关。因此,将维生素 D  纳入产前筛查的项目是一项关键性的工作。

《维生素 D  缺乏性佝偻病防治建议》中指出:如有条件孕妇,妊娠 3 个月应检测血液维生素 D  浓度。如果出现维生素 D  缺乏现象,可以适当补充维生素 D  制剂改善并维持到正常水平。美国内分泌学会 2011 年发布的《维生素 D  缺乏评估、治疗和预防的临床实践指南》认为,外周血血清 25-羟维生素 D  水平 < 20 ng/mL 者应被诊断为维生素 D  缺乏。维生素 D  对于人体的意义重大,因此开展孕期检测极其关键。

技术手段

通过维生素 D  检测的意义,可知多种维生素检测在孕产妇和新生儿中意义重大。由于部分维生素稳定性较差,如何准确检测维生素水平,就显得尤为重要,这也成为维生素检验讨论的焦点话题。其中在临床检验和临床实践中存在的一个主要问题:准确度和精密度的问题,此外还需具备良好灵敏度正确识别维生素 D  高度缺乏患者。

目前,在临床检验中主要的检测方法有:液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)、罗氏电化学发光免疫分析法。检验医学溯源联合委员会将 LC-MS/MS 认为维生素 D  检测的「金标准」,质谱法是使用脱水离子作为母离子,重现性与准确度较高。

串联质谱技术是检验领域一项用途广泛的技术,其检测范围宽、能检测样本中极微量的物质浓度。检测标本可以是孕产妇血清样本、脐带血清样本,通过离心、去蛋白、加内标等环节上机检测,分析方法包括定量和半定量两种方法。

由于血液中含有大量的纤维蛋白,加之串联质谱仪管路极细,做好进样针、管路、喷雾针的清洗,对保证检测结果的准确性非常关键。

在检测过程中还要保证充足的试剂耗材供应:高纯度的氮气、色谱级甲醇(或者一定比例的甲醇水,用来冲洗管路)、流动相等等。作为实验人员要密切关注仪器运行状态,确保液相和质谱能够处于最佳实验状态,还要关注样本检测峰形的好坏。

维生素缺乏将严重影响孕产妇和婴幼儿健康。因此,为确保母婴健康,维生素筛查非常关键,做到早发现、早治疗。身为检验人员,应不断总结学习,保证维生素检测结果的准确性,配合临床医生,把孕产妇及婴幼儿维生素检测这项工作做好。

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编辑: 孙舒宁

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