肺炎支原体的常用实验室诊断方法

2017-02-05 07:50 来源:丁香园 作者:xxll2006
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隆冬时节,天气转冷,再加上雾霾肆虐,最近儿科病号人满为患,很大一部分人是呼吸道疾病,其中支原体肺炎的发生率高居不下。肺炎支原体每 3-7 年就会流行一次,根据首都儿科研究所的监控数据,从 2015 年 5 月份开始,首都儿研所肺炎患儿的呼吸道标本中,检出肺炎支原体的比率开始升高,目前阳性率已达 50% 以上,出现肺炎支原体感染暴发流行趋势。

肺炎支原体是儿童及青少年社区获得性肺炎的重要致病菌之一,由于肺炎支原体感染的临床症状并不典型,无法与其他肺炎相区别,因此支原体肺炎的诊断主要靠实验室检测,常用的方法包括:支原体培养、血清学方法及分子诊断方法。

标本采集

肺炎支原体检测常用的标本包括:鼻咽拭子、口咽拭子、痰、组织、支气管灌洗液、脑脊液等。

采样时应注意尽量采用带塑料柄的尼龙拭子、涤纶拭子、植绒拭子或人造棉拭子,而不要采用带木柄的棉花拭子,因为后者可能含有抑制支原体生长及抑制分子反应的成分。

支原体培养

肺炎支原体培养通常采用 SP4 培养基,有液体和固体两种。在液体培养基中加有酚红,肺炎支原体水解葡萄糖使培养基 pH 值发生变化从而使培养基颜色发生变化。在固体培养基上,肺炎支原体呈典型的油煎蛋样菌落,培养法由于需要时间较长,很少用于临床诊断。

优点:1. 特异性高,阳性结果意味着 100% 的特异性;2. 能获得致病菌株,可以进一步用于分型或药敏试验;3. 有商品化的培养基(SP4 培养基)。

缺点:1. 由于支原体生长缓慢,培养时间较长,通常需要数天至数周;2. 对操作者技术要求较高;3. 敏感性较差,培养阳性率低。

血清学方法

血清学检测方法是肺炎支原体诊断和流行病学调查的主要方法,检测的抗体包括 IgM 和 IgG 两种。通常在感染后 1 周可以测到肺炎支原体抗体,3-6 周抗体滴度达到高峰,然后开始下降。急性期 IgG 抗体的阳性率小于 50%,恢复期 IgG 抗体阳性率可以达到 82%。同样,在儿童患者中,急性期 IgM 抗体的敏感性仅为 31.8%,但利用急性期好恢复期双份血清检测时,IgM 抗体的敏感性可以增加到 88.6%。因此单独的一次血清学检测存在漏诊的风险,恢复期与急性期相比抗体滴度升高 4 倍或以上有诊断意义。

优点:1. 有商品化试剂盒应用;2. 可以进行半定量的检测;

缺点:1. 特异性较差,有可能出现假阳性;2. 通常需要急性期和恢复期双份血清才能确诊;3. 样本周转时间较长,可能会影响临床的诊断及治疗;4. 部分病人 IgM 抗体持续阴性或者 IgG 抗体持续增高会影响诊断。

分子诊断方法

最常用的分子诊断方法为 PCR 技术,针对肺炎支原体的 ATP 酶基因序列,P1 粘附素基因序列及 16SrRNA 的保守区域等设计引物进行 PCR 扩增。同时实时定量 PCR 也可用于肺炎支原体的检测,与普通 PCR 相比,可以缩短样本周转时间,减少电泳等步骤。

优点:1. 有商品化试剂盒应用;2. 高灵敏度高特异性;3. 检测速度快,样本周转时间短,利于临床诊断及治疗; 4. 可以对支原体菌株进行分子分型。

缺点:1. 价格比较贵;2. 需要特殊的设备和技术;3. 检测没有标准化,缺乏临床比较验证。

总    结

多种检测方法联合应用可以提高检测的敏感性及特异性,但是由于各种方法的敏感性及特异性不同,当同时应用两种或两种以上方法时,可能会出现各种方法间结果并不相符,例如:免疫力低下的病人,不能产生正常的免疫反应,可能会出现 PCR 阳性,而血清学阴性。这个时候需要进一步联系临床,根据病人的临床症状结合实验室检测结果,做出正确的诊断。

本文作者:xxll2006,丁香园检验版版主

责任编辑:xxll2006

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本文由作者独家授权丁香园发布

编辑: 张开平

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