隆冬时节，天气转冷，再加上雾霾肆虐，最近儿科病号人满为患，很大一部分人是呼吸道疾病，其中支原体肺炎的发生率高居不下。肺炎支原体每 3-7 年就会流行一次，根据首都儿科研究所的监控数据，从 2015 年 5 月份开始，首都儿研所肺炎患儿的呼吸道标本中，检出肺炎支原体的比率开始升高，目前阳性率已达 50% 以上，出现肺炎支原体感染暴发流行趋势。
肺炎支原体是儿童及青少年社区获得性肺炎的重要致病菌之一，由于肺炎支原体感染的临床症状并不典型，无法与其他肺炎相区别，因此支原体肺炎的诊断主要靠实验室检测，常用的方法包括：支原体培养、血清学方法及分子诊断方法。
标本采集
肺炎支原体检测常用的标本包括：鼻咽拭子、口咽拭子、痰、组织、支气管灌洗液、脑脊液等。
采样时应注意尽量采用带塑料柄的尼龙拭子、涤纶拭子、植绒拭子或人造棉拭子，而不要采用带木柄的棉花拭子，因为后者可能含有抑制支原体生长及抑制分子反应的成分。
支原体培养
肺炎支原体培养通常采用 SP4 培养基，有液体和固体两种。在液体培养基中加有酚红，肺炎支原体水解葡萄糖使培养基 pH 值发生变化从而使培养基颜色发生变化。在固体培养基上，肺炎支原体呈典型的油煎蛋样菌落，培养法由于需要时间较长，很少用于临床诊断。
优点：1. 特异性高，阳性结果意味着 100% 的特异性；2. 能获得致病菌株，可以进一步用于分型或药敏试验；3. 有商品化的培养基（SP4 培养基）。
缺点：1. 由于支原体生长缓慢，培养时间较长，通常需要数天至数周；2. 对操作者技术要求较高；3. 敏感性较差，培养阳性率低。
血清学方法
血清学检测方法是肺炎支原体诊断和流行病学调查的主要方法，检测的抗体包括 IgM 和 IgG 两种。通常在感染后 1 周可以测到肺炎支原体抗体，3-6 周抗体滴度达到高峰，然后开始下降。急性期 IgG 抗体的阳性率小于 50%，恢复期 IgG 抗体阳性率可以达到 82%。同样，在儿童患者中，急性期 IgM 抗体的敏感性仅为 31.8%，但利用急性期好恢复期双份血清检测时，IgM 抗体的敏感性可以增加到 88.6%。因此单独的一次血清学检测存在漏诊的风险，恢复期与急性期相比抗体滴度升高 4 倍或以上有诊断意义。
优点：1. 有商品化试剂盒应用；2. 可以进行半定量的检测；
缺点：1. 特异性较差，有可能出现假阳性；2. 通常需要急性期和恢复期双份血清才能确诊；3. 样本周转时间较长，可能会影响临床的诊断及治疗；4. 部分病人 IgM 抗体持续阴性或者 IgG 抗体持续增高会影响诊断。
分子诊断方法
最常用的分子诊断方法为 PCR 技术，针对肺炎支原体的 ATP 酶基因序列，P1 粘附素基因序列及 16SrRNA 的保守区域等设计引物进行 PCR 扩增。同时实时定量 PCR 也可用于肺炎支原体的检测，与普通 PCR 相比，可以缩短样本周转时间，减少电泳等步骤。
优点：1. 有商品化试剂盒应用；2. 高灵敏度高特异性；3. 检测速度快，样本周转时间短，利于临床诊断及治疗； 4. 可以对支原体菌株进行分子分型。
缺点：1. 价格比较贵；2. 需要特殊的设备和技术；3. 检测没有标准化，缺乏临床比较验证。
总 结
多种检测方法联合应用可以提高检测的敏感性及特异性，但是由于各种方法的敏感性及特异性不同，当同时应用两种或两种以上方法时，可能会出现各种方法间结果并不相符，例如：免疫力低下的病人，不能产生正常的免疫反应，可能会出现 PCR 阳性，而血清学阴性。这个时候需要进一步联系临床，根据病人的临床症状结合实验室检测结果，做出正确的诊断。
本文作者：xxll2006，丁香园检验版版主
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