1α,25-(OH)2-维生素 D3 是维生素 D 的活化形式，由于其具有亲脂性的特点，并且在血液中的浓度较低（pmol/L），临床上检测其水平有较高的难度。合理选择血清中 1,25（OH）2vitD 的检测方法显得尤为重要。
放射免疫分析方法是应用较早的分析方法，由于其操作复杂、耗时、干扰因素多问题，逐渐被淘汰。目前，有两种全自动的免疫分析系统已经应用于临床，不仅能够完成自动检测，而且还可以自动的分离血清中的 1,25（OH）2vitD 进行优先检测。然而 1,25（OH）2vitD 检测的标准化问题，仍有待解决。
鉴于此，来自瑞士的 Katharina Spanaus 和 Arnold Eckardstein 做了一项评价性的研究: 对两种全自动免疫分析方法和液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）在检测血清中 1,25（OH）2vitD 浓度的不精确度、线性等指标进行了评价。
结果显示：
DiaSorin 免疫分析系统的总不精密度在 3.1%-5.2% 之间，而 IDS 系统的总不精密度在 7.1%-20.1% 之间；
DiaSorin 免疫分析系统检测血清中 1,25（OH）2vitD 浓度的偏差在 2.5% 至-0.1% 之间，而 IDS 系统的偏差在 21.3% 至 14.1% 之间。
线性分析，DiaSorin 免疫分析系统明显优于 IDS 系统。在检测室间质评样本时，DiaSorin 免疫分析系统和 IDS 系统相对 LC-MS/MS 的检测结果偏差分别为-20% 至+26%、-50% 至+51%，显然 DiaSorin 免疫分析系统检测结果和 LS-MS/MS 具有较好的一致性，并且室间质控的结果也较好。
两种免疫分析系统，在检测原理和仪器性能上有明显的差别：
DiaSorin 免疫分析系统 | IDS 系统 | |
分析仪器 | LIAISON XL | IDS-iSYS |
分离方法 | 重组功能蛋白 | 抗-1,25（OH）2vitD 抗体 |
检验抗体 | 鼠单抗 | 羊单抗 |
标记物 | 鲁米诺 | 吖啶酯 |
检测范围 | 5.0-200.0ng/L | 7.5-210.0ng/L |
进样量 | 225μL | 400μL |
维生素 D3 | 100% | 98% |
维生素 D2 | 104% | 57% |
分析发现：两种新上市的自动化免疫学方法，与传统的放射免疫方法相比，具有耗时短的特点。而在方法仪器的准确度、敏感度、不精密度方面，DiaSorin 免疫分析系统明显优于 IDS 系统，导致这种结果的原因可能与重组功能蛋白在捕获 1,25（OH）2vitD 上具有相对较高的特异性有关。并且研究表明，在 IDS 系统中，即使使用相同的捕获抗体，手工方法明显优于自动化的方法，很显然自动化的捕获方法需要进一步优化。
总之，以 LC-MS/MS 方法为参考方法，发现在部分样本中 1,25（OH）2vitD2 所占的比例较高，甚至高达 76.6%，并且证实两种免疫学方法都与 1,25（OH）2vitD2 存在交叉反应。随着临床需求，1,25（OH）2vitD 标本量的增加，使用自动化的检测仪器尤为重要，充分考虑：高通量、减少人工操作环节、尽量避免交叉反应对结果的影响。IDS 系统虽然具有相对较宽的检测范围，但在反应的敏感性、准确性和标准化方面仍有待进一步提高。
相比之下，DiaSorin 免疫分析系统以其高敏感性、低不精密度、检测范围宽、与 LC-MS/MS 具有较好的一致性等特点，使临床上 1,25（OH）2vitD 的检验诊断能力大大提高。